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冻存ATCC细胞的复苏和培养
点击次数:44 发布时间:2018-06-07
  ATCC细胞密度超过90%,并且细胞状态很好时,则复温后2个小时需要立即传代(传代的比例应依据不同的细胞而定),状态稳定,便于稳定生长。
  冻存ATCC细胞的复苏和培养:
  1.先准备好细胞培养皿或细胞培养瓶,及产品说明推荐的相应细胞培养基。并在37℃水浴中预先温热细胞培养基。(请参阅:*注1)
  2.小心取出装有细胞的冻存管,保持管盖拧紧,将冻存管盖以下的部分置于37℃水浴中并轻微的搅拌以帮助解冻。解冻过程应该尽快,大约短于2分钟或待zui后一块小冰晶体刚融化,就应将ATCC细胞冻存管取出水浴。
  3.在从水浴中取出的细胞冻存管表面喷洒70%乙醇配制的消毒剂,用无菌纸巾或纱布试干。之后的操作步骤都应该遵循在无菌条件下生物安全柜中严格操作。
  4.小心拧开冻存管的顶部,将管内容物用1ml移液枪转移到含9毫升培养基的无菌离心管中。离心5到7分钟(125×g),小心吸去上清液以去除抗冻剂(二甲基亚砜),避免丢失细胞沉淀。将细胞沉淀重悬于配好的完全培养基中。将细胞悬液转移到培养容器,轻轻摇晃使细胞均匀的分布。生长较慢的细胞株可重悬于5-8ml培养基并转移到T25培养瓶。生长较快的细胞株可重悬于12-20ml培养基并转移到T75培养瓶。ATCC网站有各个细胞株的具体生长状况及培养方法记载。
  ATCC细胞如何运输?收到细胞后如何处理?
  ATCC细胞通常保存在冻存管中用干冰运输,或是在培养瓶中常温运输。但对于中国客户,由于运输时间稍长,都是采用干冰运输的方式。
  在收到冻存细胞后,很重要的一点是迅速解冻使其立即复苏并除去DMSO,然后将它们放置到培养基中。如果做不到上面这点,需将ATCC细胞存储在液氮中(-130℃以下)。不要将冻存ATCC细胞储存在高于-130℃的温度下,这会使细胞存活率迅速下降。 上一篇 没有了 下一篇 超实用!一些实用的用于免疫组化分析的手机应用程序

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