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耐药细胞株操作流程分享
点击次数:19 发布时间:2019-01-10
  体内耐药细胞株的建立实验是通过细胞与低剂量的药物长期接触,引起细胞本身生物化学过程的改变,细胞膜上出现Pgp(或P-170)糖蛋白,使细胞逐渐对药物耐受。
  耐药细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株,也就是说,细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。
  耐药细胞株基本共性:
  1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质及糖被构成的生物膜,即细胞膜。
  2、所有的细胞都含有两种核酸:即DNA与RNA。
  3、作为遗传信息复制与转录的载体。
  4、作为蛋白质合成的机器—核糖体,毫无例外地存在于一切细胞内,核糖体,是蛋白质合成的机器,在细胞遗传信息流的传递中起重要作用。
  5、所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。
  6、能进行自我增殖和遗传
  7、新陈代谢
  8、细胞都具有运动性,包括细胞自身的运动和细胞内部的物质运动
  耐药细胞株操作流程:
  1、载体构建:将外源基因构建到合适的载体上,如需病毒转染,则包装病毒。
  2、筛选浓度测定:以14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。
  3、细胞接种:转染实验前天接种细胞, 各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和 细胞形状而定。
  4、细胞转染:用构建好的载体(或包装好的病毒)转染目的细胞。
  5、抗生素筛选。
  6、鉴定筛选结果。
  原代培养物经首次传代成功后即为细胞系,由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代,或传代次数有限,可称为有限细胞系,如可以连续培养,则称为连续细胞系,培养50代以上并无限培养下去。 所以耐药细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞。从培养代数来讲,可培养到40-50代。耐药细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。对于人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定,并连续传代的即可称为连续性株或系。 上一篇 没有了 下一篇 新品上线!基因检测宠儿“Fusion融合参考品”
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